需自备的仪器和用品
天平、研钵、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体20mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加1mL蒸馏水溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂三:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加1mL蒸馏水溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂四:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加1mL蒸馏水溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
酶液提取
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。10000g ,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2. 培养液等液体:直接检测。
测定操作表
试剂名称 | 测定管 |
试剂一(μL) | 150 |
试剂二(μL) | 10 |
酶液(μL) | 20 |
试剂三(μL) | 10 |
试剂四(μL) | 10 |
充分混匀,于微量石英比色皿/96孔板测定340处吸光值A1,然后在40℃温育20min后,再测定340nm处吸光值A2,△A=A1-A2
酶活性计算公式
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1)按照蛋白浓度计算
酶活性定义:在40℃,pH6.5条件下,每毫克蛋白每分钟催化1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
ANR活性(nmol/min/mg prot)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr) ÷T
= 80.39×ΔA÷Cpr
(2)按照样本质量计算
酶活性定义:在40℃,pH6.5条件下,每克组织每分钟催化1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
ANR活性(nmol/min/g 鲜重)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T
= 80.39×ΔA÷W
(3)按液体体积计算
酶活性定义:在40℃,pH6.5条件下,每毫升液体每分钟催化1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
ANR活性(nmol/min/mL)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷V样÷T
= 80.39×ΔA
V反总:反应体系总体积,0.2mL;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,20min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g
b. 用96孔板测定的计算公式如下
(1)按照蛋白浓度计算
酶活性定义:在40℃,pH6.5条件下,每毫克蛋白每分钟催化1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
ANR活性(nmol/min/mg prot)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr) ÷T
= 160.78×ΔA÷Cpr
(2)按照样本质量计算
酶活性定义:在40℃,pH6.5条件下,每克组织每分钟催化1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
ANR活性(nmol/min/g 鲜重)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T
= 160.78×ΔA÷W
(3)按液体体积计算
酶活性定义:在40℃,pH6.5条件下,每毫升液体每分钟催化1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
ANR活性(nmol/min/mL)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷V样÷T
= 160.78×ΔA
V反总:反应体系总体积,0.2mL;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,0.5cm;V样:加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,20min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g
BPC1332 非蛋白巯基测定测定试剂盒(微量法) 100T/96S 800
BPC1333 花青素还原酶(ANR)测定试剂盒(微量法) 100T/96S 1250
BPC1334 二氢黄酮醇还原酶(DFR)测定试剂盒(微量法) 100T/96S 1600
BPC1335 酪氨酸解氨酶(TAL)测定试剂盒(微量法) 100T/96S 1000
BPC1336 查尔酮异构酶(CHI)测定试剂盒(微量法) 100T/96S 1800
BPC1337 总皂苷测定试剂盒(微量法) 100T/96S 720
BPC1338 多胺氧化酶(PAO)测定试剂盒(微量法) 100T/96S 1700
BPC1339 多功能氧化酶(MFO)测定试剂盒(微量法) 100T/96S 1200
BPC1340 线粒体活性氧产生速率(ROS)测定试剂盒(荧光法 ) 100T/96S 720
BPC1341 脂质过氧化物(LPO)测定试剂盒(微量法) 100T/96S 1250