植物原花青素（OPC）测定试剂盒（微量法）

自备实验用品及仪器:                                                    

天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水、盐酸、无水乙醇和甲醇。

试剂组成和配制:                                                      

提取液：60%乙醇，自备，4℃保存。（60mL无水乙醇溶于40mL蒸馏水）

试剂一：8%盐酸10mL，自备，4℃保存。（800μL盐酸溶于9.2mL甲醇）

试剂二：粉剂0.1g×1瓶，4℃避光保存，临用前加10mL甲醇溶解。

测定工作液：临用前按照用量将试剂一和试剂二按照1:1混合。

空白工作液：临用前按照用量将试剂一和甲醇按照1:1混合。

OPC提取:                                                              

称取约0.1g样本，加入2mL提取液，匀浆后，60℃振荡提取2h， 10000g，25℃，离心10min，取上清待测。

测定操作表:                                                               

1、  分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至500nm，蒸馏水调零。

2、  操作表

OPC计算公式:                                                              

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.0194x+0.0006，R²=0.999

OPC含量（mg/g 鲜重）= (ΔA-0.0006）÷0.0194×V反总÷(V样÷V样总×W)×10^-3

    = 0.515×(ΔA-0.0006）÷W

V样总：加入提取液体积，2mL； V反总：反应总体积，0.2mL；V样：反应中样品体积，0.04mL；W：样品质量，g

b.用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.0097x+0.0006，R²=0.999

OPC含量（mg/g 鲜重）= (ΔA-0.0006）÷0.0097×V反总÷(V样÷V样总×W)×10^-3

= 1.03×(ΔA-0.0006）÷W

V样总：加入提取液体积，2mL； V反总：反应总体积，0.2mL；V样：反应中样品体积，0.04mL；W：样品质量，g

注意事项：                                                              

1、配制好的试剂二应尽快使用，4℃保存时间不超过一个月。

2、吸光度变化应该控制在0.01～0.8之间。否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。

3、最低检出限为10μg/g。