三、仪器与试剂

3.1 仪器

• 荧光分光光度计（或紫外-可见分光光度计）

• 恒温水浴锅（控温±1℃）

• 涡旋混合器、离心机（12,000 rpm）

• 微量移液器（10 μL、100 μL、1 mL）

• 1.5 mL离心管、石英比色皿

3.2 试剂

• 邻苯二甲醛（OPA）显色液：

• 称取20 mg OPA，溶于0.5 mL无水乙醇，加入5 mL 0.4 M硼酸缓冲液（pH 9.5）及20 μL β-巯基乙醇，避光保存（现用现配）。

• GABA标准品：纯度≥98%，配制成梯度浓度母液（0.1、0.5、1.0、5.0、10.0 μg/mL）。

• 硼酸缓冲液（pH 9.5）：0.4 M硼酸溶液调节至pH 9.5。

• 10%三氯乙酸（TCA）：用于沉淀蛋白（生物样本）。

四、操作步骤

4.1 样本前处理

1. 生物样本（如脑组织匀浆或血清）：

• 取100 μL样本，加入100 μL 10% TCA，涡旋混匀后冰浴10分钟，离心（12,000 rpm，10 min），取上清液备用。

2. 植物提取液：直接稀释至检测范围内。

4.2 反应体系

操作流程：

1. 将样本与OPA显色液混合，立即涡旋混匀10秒。

2. 60℃水浴避光反应15分钟。

3. 冷却至室温后，转移至比色皿测定。

4.3 荧光/吸光度测定

• 荧光法：激发波长340 nm，发射波长450 nm，记录荧光强度（F）。

• 比色法：420 nm波长下测定吸光度值（A）。

五、结果计算

5.1 标准曲线（示例）

• 线性方程（荧光法）：F = 500 × C（GABA浓度，μg/mL） + 10（R² ≥ 0.995）

• 线性方程（比色法）：A = 0.5 × C（GABA浓度，μg/mL） + 0.02（R² ≥ 0.990）

5.2 样本浓度计算

公式：

$${�}_{\text{样本}}(��\mathrm{/}��)=\frac{{�}_{\text{样本}}-10}{500}\text{或}\frac{{�}_{\text{样本}}-0.02}{0.5}$$

若样本经TCA处理（稀释2倍），最终浓度需乘以稀释倍数。

六、注意事项

1. 避光操作：OPA见光易分解，显色液需现用现配，反应全程避光。

2. 干扰物质：

• 样本中若含其他伯胺类物质（如谷氨酸），需预先过离子交换柱分离GABA。

• 高浓度还原剂（如抗坏血酸）可能抑制显色，需稀释样本。

3. 稳定性：显色复合物在室温下稳定约30分钟，需及时检测。