丙二醛（MDA）测定试剂盒
- 规格：50/100T
- 210.00/330.00
1.原理：
动物体内脂质中的不饱和脂肪酸，在酶或者Fe++的作用下，易氧化而生成过氧化脂质（LPO），经断链后生成丙二醛(MDA), 丙二醛在酸性条件下与硫代巴比妥酸结合, 生成红色化合物, 在535nm下有吸收峰，由此进行比色测定。
2.测定意义：
生物体内，自由基作用于脂质发生过氧化反应，氧化终产物为丙二醛，会引起蛋白质、核酸等生命大分子的交联聚合，且具有细胞毒性。机体通过酶系统与非酶系统产生氧自由基，后者能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化作用，并因此形成脂质过氧化酸。脂质过氧化作用不仅把活性氧转化成活性化学剂，即非自由基性的脂类分解产物，而且通过链式或链式支链反应，放大活性氧的作用。因此，初始的一个活性氧能导致很多脂类分解产物的形成，这些分解产物中，一些是无害的，另一些则能引起细胞代谢及功能障碍，甚至死亡，氧自由基不但通过生物膜中多不饱和脂肪酸的过氧化引起细胞损伤，而且还能通过脂氢过氧化物的分解产物引起细胞损伤。脂质氧化终产物MDA在体外影响线粒体呼吸链复合物及线粒体内关键酶活性，它的产生还能加剧膜的损伤，因而测试丙二醛的量可反映机体脂质过氧化的程度，间接的反应出细胞损伤的程度。
MDA含量是反映机体抗氧化潜在能力的重要参数，可以反映机体脂质过氧化速率和强度，也能间接反映组织过氧化损伤程度。有文献报道缺氧性心肌损伤大鼠心肌中和克山病患者体内氧自由基（OFR）含量增加。总所周知，缺氧可使心肌组织生成大量氧自由基（OFR），OFR作用于细胞膜上的不饱和脂肪酸使膜脂质产生过氧化反应，进而导致心肌细胞的损伤，并形成脂质过氧化物，MDA是体内重要的OFR的代谢产物，能较好的反映组织过氧化程度。
3.测试所需仪器设备:
可见光分光光度计,恒温水浴锅,离心机, 磁力搅拌器。
4.试剂及配置：
试剂 | 50T | 100T |
标准品储备液 | 0.5ml*1支（10μmol/ml），用时以无水乙醇1:1000稀释 | 0.5ml*1支（10μmol/ml），用时以无水乙醇1:1000稀释 |
试剂1 | 25ml*1瓶 | 50ml*1瓶 |
试剂2(20倍浓缩液） | 3ml*1瓶，测定时用双蒸水定容到60ml | 6ml*1瓶，测定时用双蒸水定容到120ml |
试剂3：粉剂一支 | 450mg*1支，溶于45ml双蒸水中，在磁力搅拌器上加热以促进溶解，待粉剂完全溶解后补足45ml。待冷却至室温以后，加入45ml冰醋酸，混匀以后即为工作液。避光冷藏可保存1个月
| 900mg*1支，溶于90ml双蒸水中，在磁力搅拌器上加热以促进溶解，待粉剂完全溶解后补足90ml。待冷却至室温以后，加入90ml冰醋酸，混匀以后即为工作液。避光冷藏可保存1个月
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*冰醋酸需自备
5. 操作步骤：
a.样本前处理:
(1)组织样本：准确称取组织的重量，按组织：生理盐水=1:9进行匀浆。匀浆以后，2500r/min, 离心10分钟, 取上清液进行检测.
(2) 血清、血浆样本：直接加样。
b. 操作表:
标准管 | 标准空白管 | 测定管 | 测定空白管 | |
10nmol/ml标准品（ml） | 0.1 | |||
无水乙醇（ml） | 0.1 | |||
测试样品（ml） | 0.1 | 0.1 | ||
试剂1（ml） | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
轻轻晃动试管，混匀
试剂2 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 |
试剂3 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | |
50%冰醋酸 | 1.5 |
混匀, 试管口用保鲜薄膜扎紧, 刺一小孔，95℃水浴40分钟，取出后流水冷却，然后3500~4000转/分, 离心10分钟, 取上清液, 535nm处，1cm光径，蒸馏水调零，比色测定各管吸光度值。
