牛C反应蛋白(CRP)ELISA Kit / bovine CRP ELISA Kit
- 48/96T
- 1380.00-2580.00
- 检测范围：0.75-120ug/ml
- bovine C-Reactive Protein,CRP ELISA Kit 0.75-120ug/ml
- 批间差：CV＜10%
- 批内差：CV＜8%
C反应蛋白（C-reactive protein，CRP）是指在机体受到感染或组织损伤时血浆中一些急剧上升的蛋白质（急性蛋白）。CRP可以激活补体和加强吞噬细胞的吞噬而起调理作用，从而清除入侵机体的病原微生物和损伤、坏死、凋亡的组织细胞，在机体的天然免疫过程中发挥重要的保护作用。CRP不仅是一种非特异的炎症标志物，其本身直接参与了炎症与动脉粥样硬化等心血管疾病，并且是心血管疾病***强有力的预示因子与危险因子。CRP与补体C1q及FcTR的相互作用使其表现出很多生物活性，包括宿主对感染的防御反应、对炎症反应的吞噬作用和调节作用等。与受损细胞、凋亡细胞及核抗原的结合，使其在自身免疫病方面也起着重要作用。
1.实验原理：
本试剂盒采用竞争法(间接法)检测样本中C反应蛋白(CRP)的含量。向预先包被了相关抗体的酶标孔中加入样本，再加入辣根过氧化物酶标记的识别抗原，在37℃下孵育1小时，两者与固相抗体竞争结合形成免疫复合物，经PBST洗涤后，结合的HRP催化TMB（四甲基联苯胺）成蓝色，随后在酸的作用下转化成黄色，在450nm波长下有吸收峰，吸光值与样本中抗原的浓度成负相关。
2.试剂盒组成：
试剂盒组成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
说明书 | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片（48） | 2片（96） | |
密封袋 | 1个 | 1个 | |
酶标包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
标准品：240ug/ml | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
标准品/样品稀释液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
酶标试剂 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂A液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂B液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
终止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
浓缩洗涤液 | （20ml×25倍）×1瓶 | （20ml×25倍）×1瓶 | 2-8℃保存 |
备注：
a.试剂盒中“样品稀释液”为0.05M的PBS，“终止液”为2M的H2SO4，洗涤液为含0.15%吐温-20的PBST，如不够可自行配制。
b.不同公司的缓冲体系存在较大差异，请勿将本试剂盒的试剂与其他公司的试剂混用以免影响实验结果。
c.浓缩洗涤液在低温下会有少量盐类析出，稍微加温后即会消失，不影响使用。
3.试剂盒保存
本试剂盒可以在2-8℃下保存6个月，在-20℃下可以保存更长的时间。酶标板为真空包装，板条可以拆卸，拆开以后如一次不能用完，请放入提供的密封袋中，放入干燥剂，2-8℃保存，在一个月之内仍然有效。试剂不能反复冻融。
4．需要而未提供的试剂和器材
1． 37℃恒温箱。
2． 标准规格酶标仪。
3． 精密移液器及一次性吸头
4． 双蒸水或超纯水
5． 干净的试管或Eppendof管
6． 吸水纸
7． 自动洗板机或8道排枪
8． ELISA数据处理软件，推荐使用ELISACalc
9． 500ml烧杯的和适当量程的量筒
5.试剂准备
a. 使用前所有试剂应置于室温平衡至少30分钟。
b. 本试剂盒可以直接加样，如浓度过高，可以进行适当比例的稀释（推荐2-5倍稀释），计算时应将结果乘以稀释的倍数。
c. 洗涤液为25倍浓缩液，使用前将所有洗涤液倒入500ml或1L的烧杯中，用双蒸水定容到500ml即为工作液。
d. 标准品的稀释：取5支干净的Eppendorf管，每管加150μl的标准品稀释液，分别标记上标准品1，标准品2，标准品3，标准品4，标准品5.取150μl标准品原液加入标记标准品1 的管中，混匀后同样取出150μl，加入下一管，以此类推直至***一管。零孔：直接加标准品/样品稀释液。（见下图）
原液 标准品1 标准品2 标准品3 标准品4 标准品5
6.洗板方法
a. 手工洗板：先洗去酶标孔中的的液体，在吸水纸上拍干，然后每孔加入300μl稀释好的洗涤液，轻轻摇晃30秒，然后甩掉，在吸水纸上拍干，重复4-5次。
b. 洗板机洗板：洗板机洗板比较便捷，但应操作熟练后使用。
7.详细操作程序
a. 使用前请先将试剂盒在室温下平衡半小时。
b. 空白孔不加样，只加显色剂A，B和终止液用于调零。
c. 标准品孔：每孔加入稀释好的标准品50μl，零孔加入标准品/样品稀释液50μl，然后加入酶标试剂50μl。
d. 样品孔：加入样品50μl（推荐直接加样，浓度高可以用样品稀释液稀释2-5倍），然后加入酶标试剂50μl。
e. 轻轻摇晃，盖上封板膜，37℃培养箱中孵育60min。
f. 将25倍浓缩洗涤液用蒸馏水25倍稀释后备用。
g. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
h. 显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。
i. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
j. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。
k. 计算：根据浓度和OD值算出标准曲线的回归方程，建议用专用计算软件进行计算，推荐使用ELISAcalc进行计算，拟合模型选用logistic曲线（四参数）。
