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大鼠C反应蛋白(CRP)ELISA Kit

BPE30459 Catalogue No.
48/96T
1380.00-2580.00
0.2-32μg/ml
Rat C-Reactive Protein,CRP ELISA Kit
批间差:CV<12%
批内差:CV<8%

C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)是指在机体受到感染或组织损伤时血浆中一些急剧上升的蛋白质(急性蛋白)。CRP可以激活补体和加强吞噬细胞的吞噬而起调理作用,从而清除入侵机体的病原微生物和损伤、坏死、凋亡的组织细胞,在机体的天然免疫过程中发挥重要的保护作用。CRP不仅是一种非特异的炎症标志物,其本身直接参与了炎症与动脉粥样硬化等心血管疾病,并且是心血管疾病***强有力的预示因子与危险因子。CRP与补体C1q及FcTR的相互作用使其表现出很多生物活性,包括宿主对感染的防御反应、对炎症反应的吞噬作用和调节作用等。与受损细胞、凋亡细胞及核抗原的结合,使其在自身免疫病方面也起着重要作用。

1.实验原理:

本试剂盒采用竞争法(间接法)检测样本中C反应蛋白(CRP)的含量。向预先包被了相关抗体的酶标孔中加入样本,再加入辣根过氧化物酶标记的识别抗原,在37℃下孵育1小时,两者与固相抗体竞争结合形成免疫复合物,经PBST洗涤后,结合的HRP催化TMB(四甲基联苯胺)成蓝色,随后在酸的作用下转化成黄色,在450nm波长下有吸收峰,吸光值与样本中抗原的浓度成负相关。

 

2.试剂盒组成:

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1份

1份


封板膜

2片(48)

2片(96)


密封袋

1个

1个


酶标包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

标准品:240ug/ml

0.5ml×1瓶

0.5ml×1瓶

2-8℃保存

标准品/样品稀释液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

酶标试剂

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

显色剂A液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

显色剂B液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

终止液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

浓缩洗涤液

(20ml×25倍)×1瓶

(20ml×25倍)×1瓶

2-8℃保存

备注:

a.试剂盒中“样品稀释液”为0.05M的PBS,“终止液”为2M的H2SO4,洗涤液为含0.15%吐温-20的PBST,如不够可自行配制。

      b.不同公司的缓冲体系存在较大差异,请勿将本试剂盒的试剂与其他公司的试剂混用以免影响实验结果。

      c.浓缩洗涤液在低温下会有少量盐类析出,稍微加温后即会消失,不影响使用。

3.试剂盒保存

本试剂盒可以在2-8℃下保存6个月,在-20℃下可以保存更长的时间。酶标板为真空包装,板条可以拆卸,拆开以后如一次不能用完,请放入提供的密封袋中,放入干燥剂,2-8℃保存,在一个月之内仍然有效。试剂不能反复冻融。

4.需要而未提供的试剂和器材

1. 37℃恒温箱。

2. 标准规格酶标仪。

3. 精密移液器及一次性吸头

4. 双蒸水或超纯水

5. 干净的试管或Eppendof管

6. 吸水纸

7. 自动洗板机或8道排枪

8. ELISA数据处理软件,推荐使用ELISACalc

9. 500ml烧杯的和适当量程的量筒

5.试剂准备

a.      使用前所有试剂应置于室温平衡至少30分钟。

b.     本试剂盒可以直接加样,如浓度过高,可以进行适当比例的稀释(推荐2-5倍稀释),计算时应将结果乘以稀释的倍数。

c.      洗涤液为25倍浓缩液,使用前将所有洗涤液倒入500ml或1L的烧杯中,用双蒸水定容到500ml即为工作液。

d.     标准品的稀释:取5支干净的Eppendorf管,每管加150μl的标准品稀释液,分别标记上标准品1,标准品2,标准品3,标准品4,标准品5.取150μl标准品原液加入标记标准品1   的管中,混匀后同样取出150μl,加入下一管,以此类推直至***一管。零孔:直接加标准品/样品稀释液。(见下图)

稀释.jpg


原液    标准品1  标准品2    标准品3    标准品4    标准品5

 

6.洗板方法

a.      手工洗板:先洗去酶标孔中的的液体,在吸水纸上拍干,然后每孔加入300μl稀释好的洗涤液,轻轻摇晃30秒,然后甩掉,在吸水纸上拍干,重复4-5次。

b.     洗板机洗板:洗板机洗板比较便捷,但应操作熟练后使用。

7.详细操作程序

a.      使用前请先将试剂盒在室温下平衡半小时。

b.     空白孔不加样,只加显色剂A,B和终止液用于调零。

c.      标准品孔:每孔加入稀释好的标准品50μl,零孔加入标准品/样品稀释液50μl,然后加入酶标试剂50μl。

d.     样品孔:加入样品50μl(推荐直接加样,浓度高可以用样品稀释液稀释2-5倍),然后加入酶标试剂50μl。

e.      轻轻摇晃,盖上封板膜,37℃培养箱中孵育60min。

f.       将25倍浓缩洗涤液用蒸馏水25倍稀释后备用。

g.     洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

h.     显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟。

i.       终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

j.       测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。

k.     计算:根据浓度和OD值算出标准曲线的回归方程,建议用专用计算软件进行计算,推荐使用ELISAcalc进行计算,拟合模型选用logistic曲线(四参数)。



样本前处理

a.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
b.血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
c.血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
d.尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
  e.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
  f.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。





货号    名称    英文    检测范围
BPE11196    人C反应蛋白(CRP)ELISA Kit    Human C-Reactive Protein,CRP ELISA Kit    0.25-40ng/ml
BPE20324    小鼠C反应蛋白(CRP)ELISA Kit    MouseC-Reactive Protein,CRP ELISA Kit    0.75-120ug/ml
BPE30459    大鼠C反应蛋白(CRP)ELISA Kit    Rat C-Reactive Protein,CRP ELISA Kit    0.2-32μg/ml
BPE40137    豚鼠C反应蛋白(CRP)ELISA Kit    Guinea pig C-Reactive Protein,CRP ELISA Kit    0.2-32μg/ml
BPE50055    猪C反应蛋白(CRP)ELISA Kit    Porcine C-reactive protein,CRP ELISA Kit    0.75-120ug/ml
BPE60031    鸡C反应蛋白(CRP)ELISA Kit     Chicken C-Reactive Protein,CRP ELISA Kit     0.1-16μg/ml
BPE80190    兔子C反应蛋白(CRP)ELISA Kit    rabbit C-Reactive Protein,CRP ELISA Kit    0.2-32μg/ml
BPE91171    犬C反应蛋白(CRP)ELISA Kit    Canine C-Reactive Protein,CRP ELISA Kit    0.25-40ng/ml
BPE92171    牛C反应蛋白(CRP)ELISA Kit    bovine C-Reactive Protein,CRP ELISA Kit    0.75-120ug/ml
BPE93180    羊C反应蛋白(CRP)ELISA Kit    bovine C-Reactive Protein,CRP ELISA Kit    0.75-120ug/ml
BPE94059    虾C反应蛋白(CRP)ELISA Kit    Shrimp C-Reactive Protein,CRP ELISA Kit    0.2-32μg/ml



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