实验准备 | 1.实验防护 |
2.实验相关设备和仪器准备 |
3.样品和试剂常温平衡30min |
4.标准品按梯度稀释 |
5.洗涤液25倍稀释 |
6.生物素抗原稀释 |
7.亲和素HRP稀释 |
实验操作 | 操作顺序 | 空白孔 | 标准品孔 | 样品孔 | 零孔 |
1 |
| 各梯度标准品50ul | 样品50ul | 标准品稀释液50ul |
2 |
| 生物素抗原50ul | 生物素抗原50ul | 生物素抗原50ul |
3 | 轻轻摇晃，盖上封板膜，37℃培养箱中孵育30min |
4 | 每孔加满洗涤液，静置30:秒后弃去，如此重复5次，拍干 |
5 |
| 加亲和素HRP50ul | 加亲和素HRP50ul | 加亲和素HRP50ul |
6 | 轻轻摇晃，盖上封板膜，37℃培养箱中孵育30min |
7 | 每孔加满洗涤液，静置30:秒后弃去，如此重复5次，拍干 |
8 | 显色剂A 50ul 再显色剂B50ul | 显色剂A 50ul 再显色剂B 50ul | 显色剂A 50ul 再显色剂B 50ul | 显色剂A 50ul 再显色剂B50ul |
9 | 轻轻震荡混匀， 37℃避光显色10分钟 |
10 | 加终止液50ul | 加终止液50ul | 加终止液50ul | 加终止液50ul |
11 | 10分钟内450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值） |
计算 | 根据浓度和OD值算出标准曲线的回归方程，再依据方程计算样本浓度。 |