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人8异前列腺素(8-iso-PG)ELISA Kit /Human 8-iso prostaglandin,8-iso-PG ELISA Kit

BPE10675 Catalogue No.
48/96T
1380.00-2580.00
4.5-720pg/ml
4.5pg/ml
批间差:CV<12%
批内差:CV<10%

PG由一个五碳环结构和两条侧链构成。其结构分为A,B,C,D,E,F,G,H,I等类型,字母右下角的阿拉伯数字表示PG分子侧链所含双键数目,如PGE1和PGE2。凡PG五碳环上的取代基在环平面以下者标以α,如PGF1α,若在环平面以上则标以β,如PGF2β。不同类型的PG,其生物学作用亦不同。目前研究较多的有PGE1,PGE2,PGF2α,PGA2,PGI2,TXA2和TXB2,其中尤以前列环素(PGI2)和血栓素(TXA2)的研究***为广泛。PG广泛存在于哺乳动物及人的各种重要组织和体液中。在血管壁、血小板、肺、肾、胃肠、脑和生殖系统等部位含量较丰富。PG的半衰期仅1~5min。6-酮-PGF1α是PGI2的稳定代谢产物。PG是在局部产生而又在局部起作用的一类激素。PG的生理作用极为广泛复杂,各型PG对不同组织和细胞呈现完全不同的作用。PG与心血管、生殖、中枢神经、呼吸、消化、泌尿系、血小板功能、炎症反应,免疫调节,以及肿瘤转移等均有一定的关系。PGI2能扩张血管,降低周围血管阻力,增加器官血流量,并有排钠利尿作用,从而使血压降低。

1.实验方法

本试剂盒采用竞争法检测样本中8异前列腺素(8-iso-PG)的含量。向预先包被了抗体的酶标孔中加入样本,再加入生物素标记的识别抗原,在37℃下孵育30min,两者与固相抗体竞争结合形成免疫复合物,经PBST洗涤除去未结合的生物素抗原,然后加入亲和素-HRP,在37℃下孵育30min,亲和素-HRP与生物素抗原结合,洗涤后结合的HRP催化TMB(四甲基联苯胺)成蓝色,随后在酸的作用下转化成黄色,在450nm波长下有吸收峰,吸光值与样本中抗原的浓度成负相关

2.试剂盒组成:

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1份

1份


封板膜

2片(48)

2片(96)


密封袋

1个

1个


酶标包被板

1×48

1×96

长期-20℃

标准品(冻干粉)

2支(定容至150μl)

2支(定容至150μl)

2-8℃

标准品/样品稀释液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃

生物素抗原(冻干粉)

1支(稀释到3ml)

1支(稀释到6ml)

长期-20℃

亲和素-HRP(浓缩液)

50μl(稀释到3ml)

100μl (稀释到6ml)

长期-20℃

生物素抗原稀释液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃

亲和素-HRP稀释液

2.95ml×1瓶

5.9ml×1瓶

2-8℃

显色剂A液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃

显色剂B液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃

终止液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃

浓缩洗涤液

(20ml*25倍)×1瓶

(20ml*25倍)×1瓶

2-8℃

备注:

1)   试剂盒中“标准品/样品稀释液”为超纯水(可用双蒸水替代),“终止液”为2M的H2SO4,洗涤液为含0.15%吐温-20的PBST,如不够可自行配制。

2) 不同公司的缓冲体系存在较大差异,请勿将本试剂盒的试剂与其他公司的试剂混用以免影响实验结果。

3)  浓缩洗涤液在低温下会有少量盐类析出,稍微加温后即会消失,不影响使用。

4)   浓缩生物素抗原和浓缩亲和素-HRP稀释前务必先离心同时应避免反复冻融

3.需要而未提供的试剂和器材

1)  37℃恒温箱。                                       2)  标准规格酶标仪。

3)  精密移液器及一次性吸头                     4)  双蒸水或超纯水

5)  干净的试管或Eppendof管                    6)  吸水纸

7)  自动洗板机或8道排枪                          8)  ELISA数据处理软件,推荐使用ELISACalc

       9)  500ml烧杯的和适当量程的量筒

4.试剂准备

1)   使用前所有试剂应置于室温平衡至少30分钟。

2)  本试剂盒可以直接加样,如浓度过高,可以进行适当比例的稀释(推荐2-5倍稀释),计算时应将结果乘以稀释的倍数。

3)  洗涤液为25倍浓缩液,使用前将所有洗涤液倒入500ml或1L的烧杯中,用双蒸水定容到500ml即为工作液。

4)  标准品的稀释:取5支干净的Eppendorf管,每管加150μl的标准品稀释液,分别标记上标准品1,标准品2,标准品3,标准品4,标准品5.取150μl标准品原液加入标记标准品1      的管中,混匀后同样取出150μl,加入下一管,以此类推直至***一管。零孔:直接加标准品/样品稀释液。(见下图)

稀释.jpg

       原液    标准品1  标准品2    标准品3    标准品4    标准品5


5)生物素抗原的稀释:抽取生物素抗原稀释液1ml到浓缩型生物素抗原中,漩涡混匀15秒至冻干粉完全溶解,然后将所有液体移入稀释液瓶中,再次漩涡混匀30秒即为生物素抗原工作液。

6)  亲和素-HRP的稀释:低速离心(使浓缩液全部沉到管底),将浓缩亲和素-HRP全部移入相应稀释液中然后漩涡混匀30秒即为亲和素-HRP工作液

5.详细操作程序

1) 使用前请先将试剂盒在室温下平衡半小时。

2) 空白孔不加样,只加显色剂A,B和终止液用于调零。

3)标准品孔:每孔加入稀释好的标准品50μl,零孔加入标准品/样品稀释液50μl,然后加入生物素抗原工作液50μl(零孔必须要做,并将其作为标曲的***一个点)

4)样品孔:加入样品50μl(推荐直接加样,浓度高可以用样品稀释液稀释2-5倍),然后加入生物素抗原工作液50μl。

5) 轻轻摇晃,盖上封板膜,37℃培养箱中孵育30min。

6) 将25倍浓缩洗涤液用蒸馏水25倍稀释后备用。

7) ***次洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

8) 加入50μl亲和素-HRP到标准品孔和样品孔中,轻轻摇晃,盖上封板膜,37℃培养箱中孵育30min。

9)  第二次洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

10)  显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟。

11)  终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色).

12)  测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。

13)  计算:根据浓度和OD值算出标准曲线的回归方程,建议用专用计算软件进行计算,推荐使用ELISAcalc进行计算,拟合模型选用logistic曲线(四参数)。



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