总皂苷测定试剂盒（微量法）

所需的仪器和用品：                                                   

酶标仪、烘箱、水浴锅、可调式移液器、96孔板、高氯酸、乙酸、超声波清洗器

试剂的组成和配制：                                                   

提取液：液体 100ml×1瓶，4℃保存；

试剂一：24ml×1瓶，4℃保存；

试剂二：高氯酸，自备；

试剂三：乙酸，自备。

总皂苷提取：                                                         

样本烘干，粉碎过筛，称取0.05g，加入1mL提取液，超声提取1h；8000g，25℃离心10min，取上清待测。

测定步骤                                                            

1、酶标仪预热30min以上，调节波长至589nm。

2、测定管：取0.5mL上清，70℃挥发至干。加入0.2mL试剂一和0.8mL试剂二，55℃水浴20min。吸取40μL加入96孔板中，再加入200μL试剂三，充分混匀后，589nm下测定吸光度A1。

3、空白管：取0.5mL提取液，70℃挥发至干。加入0.2mL试剂一和0.8mL试剂二，55℃水浴20min。吸取40μL加入96孔板中，再加入200μL试剂三，充分混匀后，589nm下测定吸光度A2。计算△A= A1-A2。

总皂苷含量计算：                                                      

1.以齐墩果酸为对照品计算

标准状态下的回归曲线为：y = 0.0036x - 0.012，R² = 0.9968，x为对照品浓度，μg/mL,y为吸光度△A。

总皂苷含量(μg/g干重)=（△A+0.012）÷ 0.0036×V样÷(V样÷V样总×W)

                        =277.78×（△A+0.012）÷W

2.     以人参皂苷Re为对照品计算

标准状态下的回归曲线为：y = 1.0233x - 0.0016，R² = 0.9983，x为对照品浓度，mg/mL,y为吸光度△A。

总皂苷含量(μg/g干重)=（△A+0.0016）÷ 1.0233×V样÷(V样÷V样总×W)×1000

                        =977.23×（△A+0.0016）÷W

V样：加入样本体积，0.5mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W：样本干重，g；1000，毫克到微克的换算系数。