食品中亚硝酸盐含量测定试剂盒(微量法) 100T/96S 380

自备实验用品及仪器：                                                 

天平、研钵或匀浆器、水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。

试剂组成和配制：                                                      

提取液一：液体50 mL×1瓶，室温保存。

提取液二：液体50 mL×1瓶，室温保存。

提取液三：液体50 mL×1瓶，室温保存。

粉剂四：粉剂 100 mg ×1支，室温保存。

试剂一：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂二：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。

样品处理：                                                           

称取样品约0.2g鲜重或0.05g干重，破碎，加入0.5 mL 提取液一，沸水浴15min，冷却至室温，加入0.5 mL提取液二，震荡摇匀，加0.5 mL 提取液三，用镊子加少量粉剂四（约1 mg），静置30min，25℃，8000g离心15 min，取上清液待测。

测定步骤和操作表：                                                   

1、  分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、  操作表

注意：空白管只需测定一次。

亚硝酸盐含量计算：                                                     

a.       用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线回归方程为：y=0.234x + 0.0002，R²= 0. 999  x为标准品亚硝酸钠浓度（μg/ml） y为吸光值A。

NO₂^-（μg/g）=（△A-0.0002）÷0.234×V样÷（V样÷V样总×W）×0.6668

                     =（A – 0.086）÷0.234×1.5×0.6668÷W

                     =4.27×（△A-0.0002）÷W

V样总：加入提取液体积，1.5 mL； V样：反应中样品体积，0.07mL；W：样品质量，g。

b.用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线回归方程为：y=0.141x +0.095，R²= 0. 9991  x为标准品亚硝酸钠浓度（μg/ml） y为吸光值A。

NO₂^-（μg/g ）=（△A-0.0002）÷0.141×V样÷（V样÷V样总×W）×0.6668

                    =（△A-0.0002）÷0.141×1.5×0.6668÷W

                    =7.09×（△A-0.0002）÷W

V样总：加入提取液体积，1.5 mL； V样：反应中样品体积，0.07mL；W：样品质量，g。

注意事项：                                                            

1.       试剂盒2-8℃保存。

2.       试剂对人体有一定的危害，请穿实验服，戴手套操作。

3.       若检测出得OD值在标准曲线范围外，请将样品进行适当的浓缩或稀释（A₅₄₀ <0.09浓缩，A₅₄₀ > 1.5 适当稀释）。

4.       最低检出限为0.5μg/g。