植物铵态氮测定试剂盒（微量法）

自备实验用品及仪器                                                    

天平、研钵、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。

试剂组成和配制                                                         

提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体9mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加1.5mL蒸馏水充分溶解。

试剂三：液体15mL×1瓶，4℃保存。

样本处理                                                                

按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，室温匀浆后于25℃，12000g离心10min，取上清待测。

测定操作表                                                              

注意：空白管只需测定一次。

计算公式                                                               

a.       用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.1535x-0.0279，R²=0.9993

NH₄⁺—N含量（μg/g 鲜重）=（△A+0.0279）÷ 0.1535×V反总÷（W×V样÷V样总）

                = 32.9×（△A+0.0279）÷W

V反总：反应总体积，0.315mL；V样：反应体系中加入样本体积，0.06mL；V样总：加入提取液体积，1mL，W：样本质量，g

b.       用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.0768x-0.0279，R²=0.9993

NH₄⁺—N含量（μg/g 鲜重）=（△A+0.0279）÷ 0.0768×V反总÷（W×V样÷V样总）

                = 65.8×（△A+0.0279）÷W

V反总：反应总体积，0.315mL；V样：反应体系中加入样本体积，0.06mL；V样总：加入提取液体积，1mL，W：样本质量，g

注意事项                                                                  

1.       提取好的待测液尽快测定，低温保存不得超过24小时。

2.       沸水浴时间不宜过长，否则会对测定结果有影响。

3.       显色后20min内完成测定。

4.       最低检出限为18μg/g。