总抗氧化能力（T-AOC）检测试剂盒（ABTS法）微板法

1.原理

在酸性条件下抗氧化物可以还原Ferric-tri-pyridyl-tria-zine(Fe³⁺-TPTZ)产生蓝色的Fe²⁺-TPTZ，随后在593nm测定蓝色的Fe²⁺-TPTZ即可获得样品中的总抗氧化能力。由于反应在酸性条件下进行，可以抑制内源性的一些干扰因素。并且由于血浆等样品中的铁离子或亚铁离子的总浓度通常低于10μM，因此血浆等样品中的铁离子或亚铁离子不会显著干扰FRAP法的检测反应。由于反应体系中的铁离子或亚铁离子是和TPTZ螯合的，样品本身含有的少量金属离子螯合剂通常也不会显著影响检测反应。

Antioxidant

Fe³⁺-TPTZ（橘黄色）——————> Fe²⁺-TPTZ (蓝色)

2. 测定意义

防御体系的抗氧化能力的强弱与健康程度存在着密切联系，该防御体系有酶促与非酶促两个体系，许多酶是以微量元素为活性中心，例如：超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽S-转移酶（GST）等，非酶促反应体系中主要为维生素、氨基酸和金属蛋白质。例如：VE、胡萝卜素、VC、半胱氨酸、蛋氨酸、色氨酸、组胺酸、葡萄糖、铜兰蛋白、转铁蛋白、乳铁蛋白等。这个体系的防护氧化作用主要通过三条途径：（1）消除自由基和活性氧以免引发脂质过氧化；（2）分解过氧化物，阻断过氧化链；（3）除去起催化作用的金属离子。防御体系各成分之间相互起到了协同作用，以及代偿作用与依赖作用。

3.测试所需仪器设备及自备试剂 

可见光分光光度计,恒温水浴锅,离心机, 漩涡混匀器，精密移液器，试管，双蒸水。

4.适用范围

本试剂盒可测定动物血清、血浆、组织以及培养细胞、培养上清液、脑积液等样本中的总抗氧化力（T -AOC)。

5.试剂及配置

6.样本处理

（1）血清（浆）：建议直接加样

（2）组织匀浆液的制备：准确称取组织重量，按重量(g)：体积(ml)=1：9的比例加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下，制备成10%的组织匀浆，2500转/分离心10分钟，取上清，再用生理盐水稀释成最佳取样浓度。

（3）细胞培养上清：建议直接加样。

7. 操作步骤

混合试剂液：200ml试剂1+20ml试剂2工作液+20ml试剂4工作液，用多少配多少，现配现用。

37℃孵育10min，593nm波长，1cm光径，双蒸水调零，测定各管吸光值

9.注意事项

（1）样品保存时间：4~8℃℃保存5~7天；如果暂时不测，超过5天以上可将样本放在-20℃以下保存，温度越低保存时间越长

（2）垂直加样及加试剂，不要加到管壁上

（3）可以现加样品后加1号试剂，但混匀要充分

（4）若为微量样品，如耳膜组织、牙髓等进行测试时，试管一定要用肥皂水煮开刷洗干净

（5）做总抗氧化能力、总氨基酸、维生素C、维生素E等的试管应与其他品种例如SOD、GSH-PX、ATPase等测试的试管分开，否则会影响酶类的活力

（5）测定总抗氧化能力、总氨基酸、维生素C、维生素E等的试管清洗时注意：要用热水加洗涤剂煮开后趁热清洗并用自来水冲十余次，单蒸水冲一遍，烤干或晾干。否则会影响其他酶类的测试结果

（6）在混匀时，最好用漩涡混匀器，使液体上下充分混匀