鸡免疫球蛋白E(IgE)ELISA Kit/Chicken Immunoglobulin E,IgE ELISA Kit
- 48/96T
- 1380.00-2580.00
- 0.04-6.4ug/ml
- 0.04-6.4ug/ml
- 批间差：CV＜10%
- 批内差：CV＜8%
免疫球蛋白E（IgE）是人体涉及免疫系统敏感度和反应的5种免疫球蛋白之一。IgE对嗜碱性粒细胞和肥大细胞具有高度亲和性，故又称为反应素或亲细胞抗体。IgE主要由呼吸道和消化道黏膜固有层的浆细胞产生，在正常人的血液中含量极低，约占血清总Ig的0.002%。IgE与I型变态反应有关，过敏体质或超敏患者，血清中IgE明显高于正常人，故IgE在血清中含量过高，常提示遗传过敏体质或I型变态反应的存在。
1.实验原理：
本试剂盒采用竞争法(间接法)检测样本中免疫球蛋白E(IgE)的含量。向预先包被了相关抗体的酶标孔中加入样本，再加入辣根过氧化物酶标记的识别抗原，在37℃下孵育1小时，两者与固相抗体竞争结合形成免疫复合物，经PBST洗涤后，结合的HRP催化TMB（四甲基联苯胺）成蓝色，随后在酸的作用下转化成黄色，在450nm波长下有吸收峰，吸光值与样本中抗原的浓度成负相关。
2.试剂盒组成：
试剂盒组成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
说明书 | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片（48） | 2片（96） | |
密封袋 | 1个 | 1个 | |
酶标包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
标准品 | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
标准品/样品稀释液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
酶标试剂 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂A液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂B液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
终止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
浓缩洗涤液 | （20ml×25倍）×1瓶 | （20ml×25倍）×1瓶 | 2-8℃保存 |
3.试剂盒保存
本试剂盒可以在2-8℃下保存6个月，在-20℃下可以保存更长的时间。酶标板为真空包装，板条可以拆卸，拆开以后如一次不能用完，请放入提供的密封袋中，放入干燥剂，2-8℃保存，在一个月之内仍然有效。试剂不能反复冻融。
4．需要而未提供的试剂和器材
1．37℃恒温箱 2．标准规格酶标仪。
3．精密移液器及一次性吸头 4．双蒸水或超纯水
5．干净的试管或Eppendof管 6．吸水纸
7．自动洗板机或8道排枪 8．ELISA数据处理软件，推荐使用ELISACalc
9．500ml烧杯的和适当量程的量筒
5.试剂准备
a. 使用前所有试剂应置于室温平衡至少30分钟。
b. 本试剂盒可以直接加样，如浓度过高，可以进行适当比例的稀释（推荐2-5倍稀释），计算时应将结果乘以稀释的倍数。
c. 洗涤液为25倍浓缩液，使用前将所有洗涤液倒入500ml或1L的烧杯中，用双蒸水定容到500ml即为工作液。
d. 标准品的稀释：取5支干净的Eppendorf管，每管加150μl的标准品稀释液，分别标记上标准品1、标准品2、标准品3、标准品4、标准品5.取150μl标准品原液加入标记标准品1的管中，混匀后同样取出150μl，加入下一管，以此类推直至***一管。零孔：直接加标准品/样品稀释液。（见下图）
原液 标准品1 标准品2 标准品3 标准品4 标准品5
6.详细操作程序
a. 使用前请先将试剂盒在室温下平衡半小时。
b. 空白孔不加样，只加显色剂A，B和终止液用于调零。
c. 标准品孔：每孔加入稀释好的标准品50μl，零孔加入标准品/样品稀释液50μl，然后加入酶标试剂50μl。
d. 样品孔：加入样品50μl（推荐直接加样，浓度高可以用样品稀释液稀释2-5倍），然后加入酶标试剂50μl。
e. 轻轻摇晃，盖上封板膜，37℃培养箱中孵育60min。
f. 将25倍浓缩洗涤液用蒸馏水25倍稀释后备用。
g. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
h. 显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。
i. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
j. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。
k. 计算：根据浓度和OD值算出标准曲线的回归方程，建议用专用计算软件进行计算，推荐使用ELISAcalc进行计算，拟合模型选用logistic曲线（四参数）。标曲示意图如下：
